土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)——高中生物選修1

對(duì)比教材《生物技術(shù)實(shí)踐》：

1. 當(dāng)檢驗(yàn)是否有雜菌污染時(shí)，應(yīng)將接種后的培養(yǎng)基與一個(gè)未接種的培養(yǎng)基（所含物質(zhì)相同）都放入適宜溫度的恒溫箱中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，分別觀察并記錄結(jié)果。如果未接種的培養(yǎng)基出現(xiàn)了菌落則存在雜菌污染；反之，則不存在。（參見課本P20上方）

2. 在對(duì)培養(yǎng)基的選擇作用進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)（這里就選擇培養(yǎng)可分解尿素的細(xì)菌為例），應(yīng)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)基選擇的菌種，并加入酚紅指示劑，如果指示劑變紅，則說(shuō)明PH升高，尿素在脲酶的作用下分解產(chǎn)生NH3，即選擇培養(yǎng)基能起到選擇作用；反之，則不能。（參見課本P26圖2-10與課題延伸第三段）

所以檢驗(yàn)雜菌污染與檢驗(yàn)選擇培養(yǎng)基的選擇作用時(shí)使用的培養(yǎng)基是不一樣的

分離能分解尿素的細(xì)菌培養(yǎng)基的特點(diǎn)

分離能分解尿素的細(xì)菌培養(yǎng)基的特點(diǎn)：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，只有能分解尿素的細(xì)菌才能以尿素為氮源生長(zhǎng)繁殖，不能分解尿素的細(xì)菌因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖。

分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)微生物，因此培養(yǎng)基中應(yīng)該加入有機(jī)碳源，如葡萄糖；分離分解尿素的菌的培養(yǎng)基從功能上分屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)該以尿素為唯一氮源；從物理性質(zhì)上分屬于固體培養(yǎng)基，因此應(yīng)加入凝固劑瓊脂糖。

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時(shí)間，對(duì)氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對(duì)所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細(xì)菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。

高中生物實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基，二者共同培養(yǎng)后現(xiàn)象有什么不同？

以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基就是選擇培養(yǎng)基，大部分細(xì)菌在這種培養(yǎng)基上不能生存，只有少部分以尿素為營(yíng)養(yǎng)物的細(xì)菌才可以生存。而完全培養(yǎng)基中，大部分細(xì)菌都可以生存。所以二者共同培養(yǎng)后會(huì)出現(xiàn)，前者培養(yǎng)基中的菌少且都可以分解尿素，后者菌多種類各異。這樣的對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)明選擇培養(yǎng)基可以有選擇性的培養(yǎng)我們想要研究的細(xì)菌，達(dá)到篩選細(xì)菌的目的。

分離土壤中分解尿素的細(xì)菌應(yīng)注意哪些無(wú)菌操作？

1. 尋找目的菌株時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。 2. 實(shí)驗(yàn)室微生物的篩選原理是人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。 3. 分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌應(yīng)配制尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。 4. 在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。 5. 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)板上的計(jì)數(shù)室邊長(zhǎng)1mm，深度0.1mm，體積0.1mm3，通過(guò)測(cè)定一個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)的微生物數(shù)量，換算得到1ml菌液中的微生物數(shù)量

這些微生物以尿素為唯一氮源的微生物的原因

（1）根據(jù)酶的專一性可以判斷，反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)棲息著許多以尿素為唯一氮源的微生物，這些微生物能分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福畯牧鑫钢蟹蛛x這些微生物必須先制備以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基，采用高壓蒸汽滅菌，采用稀釋涂布平板法接種，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察其中一個(gè)平板的菌落分布如圖所示，推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是涂布不均勻，如果發(fā)現(xiàn)每個(gè)平板中菌落形態(tài)多樣，其原因可能是尿素分解菌的種類較多，或者操作過(guò)程污染了雜菌． （2）果膠酶是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶等；在探究果膠酶的用量實(shí)驗(yàn)中，因變量是果汁的體積（或果汁的澄清度）． （3）植物組織培養(yǎng)中，用體積分