為什么用OD260/OD280評定核酸純度

核酸的最大吸收波長是260nm，這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。

在波長260nm紫外線下，1 OD值的光密度相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml；單鏈DNA或RNA為40μg/ml；寡核苷酸為20μg/ml?？梢源藖碛嬎愫怂針悠返臐舛?。

通過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值（A260/A280）可以估計核酸的純度。純DNA的比值為1.8，純RNA的比值為2.0。若DNA比值高于1.8，說明制劑中RNA尚未除盡。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質將導致比值降低。樣品中如混有RNA比值上升。

擴展資料

顯示DNA的傳統(tǒng)方法是富爾根（Feulgen）反應，切片先用稀鹽酸處理，DNA經弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開，脫氧核糖的一端釋放出醛基，并在原位與Schiff試劑反應生成紫紅色產物。

原理同PAS反應，使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響，故染色具有DNA特異性。準確的溫度和鹽酸濃度，適宜的水解時間是成功的關鍵。水解過度或不足均降低染色強度。

核酸可分為脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。

核酸不但是一切生物細胞的基本成分，還對生物體的生長、發(fā)育、繁殖、遺傳及變異等重大生命現象起主宰作用。它在生物科學的地位，可用“沒有核酸就沒有生命”這句話來概括。

參考資料來源：百度百科-核酸

參考資料來源：百度百科-核酸顯示法

參考資料來源：百度百科-OD260/280比值

酵母核糖核酸的分離和鑒定。實驗原理

一、 實驗目的

1、掌握酵母RNA提取的方法。

2、了解核酸的組成。

3、掌握鑒定核酸組分的方法和操作。

二、 實驗原理

酵母核酸中RNA含量較多，DNA則少于2%。RNA可溶于堿性溶液，當堿被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到RNA制品。但是用堿液提取的RNA有不同的降解。RNA含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸等組分，加入硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在(見實驗內容)

三、 實驗步驟

1、 用托盤天平稱1g干酵母于研缽中，加入少許石英砂，再加入2ml 0.04mol/LNaOH溶液，在研缽中充分研磨至少5min。

2、 再加4ml 0.04mol/LNaOH溶液于勻漿液中，混勻后，將勻漿液轉移到大試管中，再用4ml 0.04mol/LNaOH溶液洗滌研缽，洗滌液并入勻漿液中。

3、 將大試管小心在沸水浴中加熱30min，冷卻后倒入離心管中，與另一組同學的離心管在托盤天平上平衡，然后兩組的離心管對稱地放入離心機中，2000r/min下離心15min。

4、 吸取10ml酸性乙醇溶液于小燒杯中，將離心管上清液小心倒入小燒杯中，邊倒入邊攪拌，直到RNA沉淀完全。

5、 將小燒杯中的液體倒入2個干凈的離心管，平衡、離心（2000r/min）3min。

6、 棄去兩離心管上清液，各離心管中加入95%乙醇2.5ml，振蕩、混勻、平衡、離心（2000r/min）3min。

7、 棄去兩離心管上清液，各離心管加入3ml 1.5mol/L硫酸，混勻、倒入同一個大試管中，貼上標簽，放在試管架上，備用。

8、 將水解液在沸水浴中加熱至少10min，使沉淀RNA充分水解。

9、 取一支試管A，加入1ml 0.1mol/L硝酸銀溶液，再逐滴加入濃氨水至沉淀消失，然后加入1ml水解液放置片刻，觀察有無白色嘌呤堿的銀化合物沉淀。

10、 另取一支試管B，加入水解液1ml，三氯化鐵濃鹽酸溶液2ml和地衣酚乙醇溶液0.2ml（約4滴），混勻，用試管夾夾好后放到沸水浴中3~5min，注意觀察溶液是否變成綠色，說明核糖的存在。

11、 再取一支試管C，加入水解液1ml和定磷試劑1ml，混勻，在沸水浴中加熱，注意觀察溶液顏色的變化，溶液變藍，說明磷酸存在。

注意事項：離心一定要平衡對稱放入離心機中，離心機達到設置轉速時才能離開。

四、 實驗結果

第6步中離心管底部有不少的RNA沉淀。

試管A：出現白色渾濁現象。有嘌呤堿存在。

試管B：加熱后，出現鮮綠色，且隨著加熱時間延長，顏色越來越深。有核糖存在。

試管C：加熱后，出現藍色，且隨著加熱時間延長，顏色越來越深。有磷酸存在。

說明RNA的組分中有嘌呤堿、核糖、磷酸。

分析：

本實驗選用酵母，是因為酵母中RNA含量較多，且價格便宜。RNA可溶于堿性溶液，所以本實驗用0.04mol/LNaOH溶液來提取。RNA不溶于乙醇，可用酸性乙醇使RNA從溶液中沉淀出來，再用乙醇洗滌沉淀，可得到RNA粗制品。

研磨和NaOH使酵母細胞破裂，RNA主要存在于細胞質中，所以RNA被釋放出來，同時，NaOH使蛋白質變性。

加入酸性乙醇，一方面可以中和NaOH，另一方面，使RNA從溶液中沉淀下來。

RNA含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸等組分，加入硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。

（1）、強酸使核酸分子的有機磷消化為無機磷，使之與鉬酸銨結合成磷鉬酸銨（黃色沉淀）
PO43- + 3NH4+ + 12MoO42- + 24H+ ===(NH4)3PO4.12MoO3.6H2O + 6H2O

當有還原劑（如維生素C）存在時，Mo6+被還原成Mo4+，再與試劑中的其它MoO42-結合成Mo（MoO4）2，呈藍色，稱鉬藍。所以試管C中會出現藍色。

（2）、RNA與硫酸共熱，生成的核糖進而脫水轉化為糠醛，三氯化鐵作為催化劑，可與地衣酚反應，生成綠色化合物，所以試管B中出現綠色。（OR苔黑酚）

（3）、嘌呤堿可與硝酸銀反應產生白色的飄零銀化合物沉淀。所以試管A中出現渾濁現象。

（4）、不檢測嘧啶堿，是因為與嘌呤堿相比，它難以被水解下來，同時它難檢測且現象不明顯。

擴展資料：

酵母核酸提取原理

提取和制備RNA 的首要問題是選RNA 含量高的材料。微生物是工業(yè)上大量生產核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最為理想，因為酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.516%），而且菌體容易收集，RNA 也易于分離。

RNA 提制過程首先要使RNA 從細胞中釋放，并使它和蛋白質分離，然后將菌體除去。再根據核酸在等電點時溶解度最小的性質，將pH 調至2.0～2.5，使RNA 沉淀，進行離心收集。然后運用RNA 不溶于有機溶劑乙醇的特性，以乙醇洗滌RNA 沉淀。

提取RNA 的方法很多，在工業(yè)生產上常用的是稀堿法和濃鹽法。濃鹽法是在加熱的條件下，利用高濃度的鹽改變細胞膜的透性，使RNA 釋放出來，此法易掌握，產品顏色較好。

使用濃鹽法提出RNA 時應注意掌握溫度，避免在20～70℃之間停留時間過長，因為這是磷酸二酯酶和磷酸單酯酶作用的溫度范圍，會使RNA 因降解而降低提取率。在90～100℃條件下加熱可使蛋白質變性，破壞磷酸二酯酶和磷酸單酯酶，有利于RNA 的提取。

參考資料：百度百科—酵母核酸

核酸分離提取的原則是什么？

核酸分離提取的原則 核酸包括DNA、RNA兩種分子，在細胞中都是以與蛋白質結合的狀態(tài)存在。真核生物的染色體DNA為雙鏈線性分子，原核生物的“染色體”、質粒及真核細胞器DNA為雙鏈環(huán)狀分子；有些嗜菌體DNA有時為單鏈環(huán)狀分子，RNA分子在大多數生物體內均是單鏈線性分子，不同類型的RNA分子可以具有不同的結構特點，如真核mRNA分子多數在3’端帶有poly(A)結構，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多種多樣，有雙鏈環(huán)狀、單鏈環(huán)狀、雙鏈線狀及單鏈線狀等。 95%的真核生物DNA主要存在于細胞核內，其它5%為細胞器DNA，如線粒體、葉綠體等。RNA分子則主要存在于細胞質中，約占75%，另有10

如何判斷提取質粒DNA的純度

可以通過紫外吸收檢測。

因為核酸的最大吸收波長為260nm，蛋白質為280nm，在波長260nm時，1OD值相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml，單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml，可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm得OD值的比值，估計核酸的純度。

純凈DNA的比值為1.8, RNA為2.0。若比值高于1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除盡，若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。

270nm存在高吸收表明有酚的干擾。 紫外分光光度法只能用于測定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液，對濃度更小的樣品，可采用熒光分光光度法。

擴展資料：

在判斷過程中，也有可能出現質粒DNA提取純度失敗的情況，具體可能是有以下幾個原因：

1、菌體量可能過大,裂解不充分,或裂解液與中和液比例不適當；

2、混合時過于劇烈,可能會帶來基因組DNA片段的污染；

3、Rnase失活,可能帶來RNA污染；

4、離心不充分（有絮狀物在上層）,或在離心后吸取上清時,將沉淀吸入,會帶來蛋白質污染.

參考資料來源：百度百科——質粒DNA純化

核酸在分離與純化 時，需要用那些物質？其作用是什么？

1 加入濃鹽溶液（如NaCl） 核酸-蛋白質加入NaCl后，破壞靜電吸力，使氫鍵破壞，核蛋白解聚； 2 加入SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外，還具有使核酸從蛋白質上游離出來的功能； 3 酚/氯仿抽提 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并對核酸酶有抑制作用。 氯仿比重大，能加速有機相與水相分層，減少殘留在水相中的酚，同時氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 在酚/氯仿抽提核酸提取液時，需要振搖，為防止起泡和促使水相與有機相的分離，再加上一定量的異戊醇（酚：氯：異戊醉=25：24：1）。