我想問一下熒光定量PCR法用2-△△Ct計(jì)算相對(duì)定量時(shí)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差是如何計(jì)算的

這個(gè)很簡(jiǎn)單啊。你做了一次實(shí)驗(yàn)，得到的樣本做了一次PCR，得到了一次的相對(duì)定量（設(shè)對(duì)照組為1）。然后重新做實(shí)驗(yàn)，再做PCR，又得到一組，這樣至少重復(fù)3次，就有3組相對(duì)定量了。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差 對(duì)照組的標(biāo)準(zhǔn)差：取對(duì)照組的平均CT值設(shè)為1， 3次試驗(yàn)的CT值根據(jù)2-△△Ct計(jì)算相對(duì)量，可以算出對(duì)照組的標(biāo)準(zhǔn)差。

做熒光定量PCR時(shí)，它的計(jì)算公式是什么?

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n為擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，X0為初始模板量，Ex為擴(kuò)增效率，N為熒光擴(kuò)增信號(hào)達(dá)到閾值強(qiáng)度時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。

起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。

擴(kuò)展資料

傳統(tǒng)定量PCR方法簡(jiǎn)介：

1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。

在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。

2）競(jìng)爭(zhēng)法：選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。

擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。

參考資料來(lái)源：百度百科-熒光定量PCR

qPCR數(shù)據(jù)中對(duì)照組在表格中標(biāo)準(zhǔn)差怎么計(jì)算

3. Real-time qPCR定量方法 可以分為絕對(duì)定量和相對(duì)定量。絕對(duì)定量是用一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同的條件下目的基因測(cè)得的熒光信號(hào)量同標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而得到目的基因的量。該標(biāo)準(zhǔn)品可以是純化的質(zhì)粒DNA，體外轉(zhuǎn)錄的RNA，或者是體外合成的ssDNA。相對(duì)定量可以分為比較Ct法和其他一些相對(duì)方法。比較Ct指的是通過與內(nèi)參基因Ct值之間的相差來(lái)計(jì)算基因表達(dá)差異,也稱之是2-DDCt 。 3.1絕對(duì)定量 從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得線性方程： Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%，所以可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 如果未知樣品的 Ct=25， 代入方程： 25=-3

請(qǐng)問：做熒光定量PCR時(shí)，△△Ct值是什么意思，它的計(jì)算公式是什么？

△△Ct是熒光定量計(jì)算公式的簡(jiǎn)化形式，用于比較不同樣品之間的差別或變化比率。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX?+lgN/lg(1+Ex)，其中，n為擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，X?為初始模板量，Ex為擴(kuò)增效率，N為熒光擴(kuò)增信號(hào)達(dá)到閾值強(qiáng)度時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物的量?！鰿t(n)=Ct（目的基因）-Ct（內(nèi)參基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。

起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。

擴(kuò)展資料

熒光定量PCR的原理：

熒光定量PCR技術(shù)：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過熒光信號(hào)不斷累積而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR全程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，對(duì)全程PCR擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，根據(jù)反應(yīng)時(shí)間和熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲線。

實(shí)時(shí)熒光定量常用的熒光化學(xué)分類有SYBR Green I法和Tag Man探針法。

Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

參考資料來(lái)源：百度百科-熒光定量PCR

參考資料來(lái)源：百度百科-實(shí)時(shí)熒光定量PCR

我想問一下熒光定量PCR法用2-△△Ct計(jì)算相對(duì)定量的問題

做了一個(gè)實(shí)驗(yàn)，內(nèi)部參考電壓可以得到幾個(gè)CT值，會(huì)得到多個(gè)目標(biāo)基因。在這種情況下，根據(jù)CT值的平均值，將得到的比率（相對(duì)量）。 實(shí)驗(yàn)肯定不是唯一的一次，至少重復(fù)3次。這將是一個(gè)倍數(shù)的3個(gè)或更多，得到。 3個(gè)以上的值，你可以計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的。