脂類的化學(xué)顯示法和特異染色法
- 教育綜合
- 2024-01-26 07:57:16
什么是細胞化學(xué)法,在細胞內(nèi)脂類的顯示中有什么
細胞化學(xué)法:是指在不破壞細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的狀況下,用生化的和物理的技術(shù)對各種組分做定量的分析,研究其動態(tài)變化,了解細胞代謝過程中各種細胞組分的作用。
在細胞內(nèi)脂類的顯示可以采用自發(fā)熒光或吸收熒光素的方法,確定脂類的位置與分布狀態(tài)。
擴展資料:
蛋白質(zhì)的顯示:
顯示蛋白質(zhì)所用的米氏反應(yīng),其中硝基汞試劑作用于細胞中蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的酪氨酸基,形成紅色沉淀,在重氮基反應(yīng)中氫氧化重氮與酪氨酸、色氨酸和組氨酸基反應(yīng)形成有顏色的復(fù)合物。
某些碳水化合物、酯類和DNA可用對其醛基有特異結(jié)合的試劑,如雪夫氏試劑。對核酸的染色方法與核苷酸磷酸、碳水化合物和嘌呤及嘧啶的三種成分的特性有關(guān)。
參考資料來源:百度百科-細胞化學(xué)
請敘述細胞化學(xué)法在細胞內(nèi)脂類的顯示實驗中的應(yīng)用?
1. 金屬沉淀法:利用金屬化合物在反應(yīng)過程中生成有色沉淀,借以辨認所檢查的 物質(zhì)或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS 或PbS 有色沉淀,而顯示出酶活性。 2. 偶氮偶聯(lián)法:酚類化合物與偶氮染料結(jié)合后可以形成耐曬染料。 3. Schiff 反應(yīng):細胞中的醛基可使Schiff 試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。這種反應(yīng)通 常用于顯示糖和脫氧核糖核酸(Feulgen 反應(yīng))。 4. 聯(lián)苯胺反應(yīng):過氧化氫酶分解H202。產(chǎn)生新生氧,后者再將無色的聯(lián)苯胺氧化 成聯(lián)苯胺藍,進而變成棕色化合物。 5. 普魯士藍反應(yīng):三價鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成普魯士藍。 6. Formazane 反應(yīng):怎么檢測生物組織中的油脂
脂肪和類脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上,脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存積于脂肪組織中,并以油滴狀的微粒存在脂肪細胞漿內(nèi)。 在病理檢驗中,脂類染色法最常用以證明脂肪變性,脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料,最常用的有蘇丹Ⅲ,蘇丹Ⅳ,蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色,實際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。經(jīng)研究認為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時,對蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原理,適當提高溫度(37℃-60℃)對組織切片染色效果是有高倍顯微鏡觀察脂肪的染色方法?急?。?!
答:1、實驗原理:脂肪可能被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)。 2、實驗材料:選擇花生或含油脂多的作實驗材料。 3、實驗過程:①取材:取一粒浸泡過的花生種子,去掉種皮。②切片:用刀片在花生子葉的橫斷面上切下若干薄片,放入盛有清水的培養(yǎng)皿中待用。③制片:從培養(yǎng)皿中選取最薄切片,用毛筆蘸取放在載玻上中央。④染色:在花生子葉薄片上滴2-3滴蘇丹Ⅲ染液,染色3分鐘。用吸水紙吸取染液,再用50%的酒精洗去浮色。蓋上蓋玻片。⑤觀察:先用低倍,再轉(zhuǎn)到高倍鏡觀察。常用的細胞染色方法有哪些
常用的細胞染色方法有:
1、簡單染色法,常用堿性染料如美藍等進行簡單染色;
2、革蘭氏染色法,主要包括結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復(fù)染四個過程;
3、瑞氏染色法,瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍組成;
4、吉姆薩染色法,吉姆薩染色原理與結(jié)果和瑞特染色法基本相同;
5、細胞免疫熒光染色法,免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合。
染色是生物顯微玻片標本制作中最重要的環(huán)節(jié)之一。先把破壞細胞膜的選擇透過性,再使用染色劑,將生物組織浸入染色劑內(nèi),使組織細胞的某一部分染上與其他部分不同的顏色或深度不同的顏色,產(chǎn)生不同的折射率,以便觀察。
另外,銀染法也較常用。當組織塊浸入硝酸銀溶液中時,有的組織結(jié)構(gòu)能直接把硝酸銀還原,使銀粒附于其上,呈棕黑色或棕黃色。有些結(jié)構(gòu)本身對硝酸銀無直接還原能力,若加入還原劑,可使硝酸銀還原沉淀顯色。
擴展資料:
染色細胞固定有物理法與化學(xué)法,物理法為干燥和火焰固定,化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
1、偶氮偶聯(lián)法:利用人工合成的酶底物,在酶作用下,產(chǎn)生分解產(chǎn)物,再與重氮鹽結(jié)合引起偶氮偶聯(lián),使其形成不溶性的偶氮色素,以此證明酶的存在。
2、聯(lián)苯胺法:粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫,釋放新生態(tài)氧,使無色的聯(lián)苯胺形成藍色沉淀。
3、普魯士藍法:細胞內(nèi)、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成藍色亞鐵氰化鐵沉淀。
4、雪夫反應(yīng):過碘酸氧化細胞內(nèi)糖類中乙二醇基形成乙醛基,醛基與雪夫試劑作用,使無色品紅形成紅色沉淀。
5、金屬沉著法:其他尚有物理學(xué)方法,如脂溶性染料染色(顯示脂質(zhì))、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細胞學(xué)診斷。
參考資料:百度百科——瑞氏染色法
參考資料:百度百科——革蘭氏染色法
參考資料:百度百科——吉姆薩染色
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