雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炘趺崔D(zhuǎn)染目的和內(nèi)參兩種質(zhì)粒

那就需要看你的點突變質(zhì)粒會不會影響熒光素酶的表達。一般情況沒有什么影響。 具體實驗這塊就在于你的實驗設計以及考察方面了，加油~

pgl3質(zhì)粒sv40啟動子什么作用

利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)探討活化T細胞核因子（NFAT）能否調(diào)控常見組成性啟動子CMV,SV40和TK,為不同條件下選擇合適雙熒光報告系統(tǒng)內(nèi)參提供依據(jù)。方法：用限制性內(nèi)切酶BglⅡ和HindⅢ分別從質(zhì)粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK啟動子,克隆至pGL3-basic載體中,構(gòu)建成pCMV-Luc和pTK-Luc載體。將構(gòu)建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control（SV40啟動子驅(qū)動）,分別與SV40（pBIND）和TK（pRL-TK）兩種啟動子驅(qū)動的兩種內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入HEK293細胞;觀察過表達組成性活化NFAT后相對熒光素酶活性讀數(shù)的改變。結(jié)果：

哪位同學可以介紹下Luciferase 原理

自然界中廣泛分布著生物發(fā)光有機體,其中包括細菌、真菌、魚、昆蟲等.在這些生物發(fā)光有機體中催化生物發(fā)光反應的各種酶都稱之為熒光素酶（Luciferases）,底物則命名為熒光素（Luciferin）.自1986— 1987 年首次被當作報告基因使用以來,熒光素酶基因已成為目前運用最廣泛的報告基因之一.盡管來自不同物種的熒光素酶及底物存在有很大的差異,但有一個共同點,即在生物發(fā)光反應體系中均需發(fā)生氧化反應.它通過兩個步驟使底物熒光素發(fā)生氧化作用,而產(chǎn)生發(fā)光反應,此反應是ATP 依賴性的.雜環(huán)熒光素首先腺苷化,然后通過氧化脫羧作用,產(chǎn)生AMP、CO2,并通過激活的熒光素中間產(chǎn)物發(fā)射光. 將反應所需的

通過基因傳到方法轉(zhuǎn)染T細胞.請問是如何轉(zhuǎn)染的

Luciferase報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達功能

空載pgl3-basic雙熒光素酶會表達嗎

利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)探討活化T細胞核因子（NFAT）能否調(diào)控常見組成性啟動子CMV,SV40和TK,為不同條件下選擇合適雙熒光報告系統(tǒng)內(nèi)參提供依據(jù)。方法：用限制性內(nèi)切酶BglⅡ和HindⅢ分別從質(zhì)粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK啟動子,克隆至pGL3-basic載體中,構(gòu)建成pCMV-Luc和pTK-Luc載體。將構(gòu)建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control（SV40啟動子驅(qū)動）,分別與SV40（pBIND）和TK（pRL-TK）兩種啟動子驅(qū)動的兩種內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入HEK293細胞;觀察過表達組成性活化NFAT后相對熒光素酶活性讀數(shù)的改變。結(jié)果：