通過(guò)哪些實(shí)驗(yàn)方法從核酸，蛋白和亞細(xì)胞定位水平檢測(cè)某藥物對(duì)某蛋白質(zhì)表達(dá)表達(dá)的影響？
- 教育綜合
- 2022-09-15 12:58:43
通過(guò)哪些實(shí)驗(yàn)方法從核酸，蛋白和亞細(xì)胞定位水平檢測(cè)某藥物對(duì)某蛋白質(zhì)表達(dá)表達(dá)的影響？求大神指點(diǎn)
A、不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)行使不同的功能，細(xì)胞中蛋白質(zhì)的種類(lèi)越多，通常細(xì)胞的功能越復(fù)雜，A錯(cuò)誤．B、細(xì)胞膜上有運(yùn)載物質(zhì)的載體蛋白、細(xì)胞質(zhì)中有起催化作用的酶、細(xì)胞核中的染色體上有與DNA結(jié)合的有蛋白質(zhì)，不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)功能不同，是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者，B正確．C、DNA主要存在于細(xì)胞核中，RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，C錯(cuò)誤．D、人細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)都是DNA，只有少數(shù)病毒體內(nèi)只含RNA的遺傳物質(zhì)才是RNA，D錯(cuò)誤．故選：B．蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)有哪幾種方法
有三種，第一是用DNA探針檢測(cè)，看目的基因是否存在。第二種是用mRNA做探針，看是否有由DNA轉(zhuǎn)錄形成的mRNA，原理和前面是一樣的，利用堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。前面兩種都是在分子水平檢測(cè)，第三種是在個(gè)體水平直接檢測(cè)的。比如：直接拿害蟲(chóng)去侵蝕抗蟲(chóng)棉哪些實(shí)驗(yàn)方法可檢測(cè)細(xì)胞中某種蛋白表達(dá)量？
蛋白質(zhì)分子中關(guān)鍵活性部位氨基酸殘基的改變，會(huì)影響其生理功能，甚至造成分子?。╩olecular disease）。例如鐮狀細(xì)胞貧血，就是由于血紅蛋白分子中兩個(gè)β亞基第6位正常的谷氨酸變異成了纈氨酸，從酸性氨基酸換成了中性支鏈氨基酸，降低了血紅蛋白在紅細(xì)胞中的溶解度，使它在紅細(xì)胞中隨血流至氧分壓低的外周毛細(xì)血管時(shí)，容易凝聚并沉淀析出，從而造成紅細(xì)胞破裂溶血和運(yùn)氧功能的低下。另實(shí)驗(yàn)證明，若切除了促腎上腺皮質(zhì)激素或胰島素A鏈N端的部分氨基酸，它們的生物活性也會(huì)降低或喪失，可見(jiàn)關(guān)鍵部分氨基酸殘基對(duì)蛋白質(zhì)和多肽功能的重要作用。 所謂“分子病”，首先是蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變，從而引起其功能的異常或喪失所造成檢測(cè)基因表達(dá)的方法
主要用探針檢測(cè)mRNA或用抗體檢測(cè)出表達(dá)的蛋白質(zhì)(轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)特異mRNA的檢測(cè)和翻譯水平上對(duì)特異蛋白質(zhì)的檢測(cè))
一、外源基因轉(zhuǎn)錄水平的鑒定
基因表達(dá)分為轉(zhuǎn)錄及翻譯兩階段，轉(zhuǎn)錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過(guò)程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質(zhì)的過(guò)程，檢測(cè)外源基因的表達(dá)就是檢測(cè)特異mRNA及特異蛋白質(zhì)的生成。所以基因表達(dá)檢測(cè)分為兩個(gè)水平。
即轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)特異mRNA的檢測(cè)和翻譯水平上對(duì)特異蛋白質(zhì)的檢測(cè)。轉(zhuǎn)錄水平上的檢測(cè)主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測(cè)RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點(diǎn)雜交和印跡雜交。
也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測(cè)外源DNA在植物體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后再經(jīng)PCR擴(kuò)增。
如果從細(xì)胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴(kuò)增條帶，則表明外源基因?qū)崿F(xiàn)了轉(zhuǎn)錄。此法簡(jiǎn)單、快速，但對(duì)外源基因轉(zhuǎn)錄的最后決定，還需與Northern雜交的實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)合。
二、外源基因表達(dá)蛋白的檢測(cè)
表達(dá)蛋白的檢測(cè)方法有三種：
1、生化反應(yīng)檢測(cè)法：主要通過(guò)酶反應(yīng)來(lái)檢測(cè)；
2、免疫學(xué)檢測(cè)法：通過(guò)目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)，具體方法有Western雜交、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；
3、生物學(xué)活性的檢測(cè)。
Western雜交是將聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離抗原（Antigen）固定在固體支持物上（如硝酸纖維素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白質(zhì)在凝膠中遷移率不同，據(jù)此可確定特定的抗原存在與否以及相對(duì)豐度，或者蛋白質(zhì)是否遭到降解等。
蛋白質(zhì)電泳后轉(zhuǎn)到NC膜，放在蛋白質(zhì)（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點(diǎn)，然后用含有放射性標(biāo)記或酶標(biāo)記的特定抗體雜交，抗原-抗體結(jié)合，再通過(guò)放射性自顯影或顯色觀察。
擴(kuò)展資料
外顯子與內(nèi)含子表達(dá)過(guò)程中的相對(duì)性 從內(nèi)含子與外顯子的定義來(lái)看，兩者是不能混淆的，但是真核生物的外顯子也并非都“顯”（編碼氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全“不顯”之外，幾乎全部的結(jié)構(gòu)基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸，還有完全不編碼基酸的外顯子，如人類(lèi)G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。
已發(fā)現(xiàn)一個(gè)基因的外顯子可以是另一基因的內(nèi)含子，所這亦然。以小鼠的淀粉酶基因?yàn)槔?，?lái)源于肝的與來(lái)源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4個(gè)外顯子，肝生成的淀粉酶不保留外顯子1，而唾液腺中的淀粉酶則保留了外顯子1的50bp順序，但把外顯子2與前后兩段內(nèi)含子一起剪切掉，經(jīng)過(guò)這樣剪接，外顯子2就變成唾液淀粉酶基因中的內(nèi)含子。
同一基因在不同組織能生成不同的基因產(chǎn)物來(lái)源于不同組織的類(lèi)似蛋白，可以由同一基因編碼產(chǎn)生，這種現(xiàn)象首先是由于基因中的增強(qiáng)子等有組織特異性，它能與不同組織中的組織特異因子結(jié)合，故在不同組織中同一基因會(huì)產(chǎn)生不同的轉(zhuǎn)錄物與轉(zhuǎn)錄后加工作用。
此外真核生物基因可有一個(gè)以一的poly(A)位點(diǎn)，因此能在不同的細(xì)胞中產(chǎn)生具有不同3’末端的前mRNA，從而會(huì)有不同的剪接方式。由于大多數(shù)真核生物基因的轉(zhuǎn)錄物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同組織、細(xì)胞中會(huì)有不同的因子干預(yù)多聚腺苷酸化作用，最后影響剪接模式。
參考資料來(lái)源：百度百科-基因表達(dá)
