如何進(jìn)行DNA甲基化分析

基因甲基化的檢測(cè)方法主要有以下幾種： 甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP) 用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物，如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段，則說明該位點(diǎn)存在甲基化；反之，說明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。 2、亞硫酸氫鹽測(cè)序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP) 用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行P

基因甲基化檢測(cè)、甲基化PCR 的原理是什么

一種全新的DNA甲基化研究方法——Pyrosequencing技術(shù) DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位點(diǎn)，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域，在哺乳動(dòng)物中mC約占C總量的2－7％。一般說來(lái)，DNA的甲基化會(huì)抑制基因的表達(dá)。DNA的甲基化對(duì)維持染色體的結(jié)構(gòu)、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發(fā)生發(fā)展都起重要的作用。 C

DNA甲基化的檢測(cè)方法主要包括哪些？

去哪里找最出色的生命科學(xué)學(xué)術(shù)交流論壇？>>> 方法概括起來(lái)可分為三類：基因組整體水平的甲基化檢測(cè)、基因特異位點(diǎn)甲基化的檢測(cè)和新甲基化位點(diǎn)的尋找。 1) 基因組整體水平甲基化分析 a) 高效液相色譜柱（HPLC）及相關(guān)方法 b) SssI 甲基轉(zhuǎn)移酶法 c) 免疫化學(xué)法 d) 氯乙醛法 2) 特異性位點(diǎn)的DNA甲基化的檢測(cè) a) 甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶(MS-RE)-PCR/Southern法 b) 直接測(cè)序法 c) 甲基化特異性的PCR（methylation-specific PCR, MS-PCR） d) 甲基化敏感性單核苷酸引物延伸(Ms-SnuPE) e) 結(jié)合重亞硫酸鹽的限制性內(nèi)切

DNA甲基化檢測(cè)有哪些方法？？

方法概括起來(lái)可分為三類：基因組整體水平的甲基化檢測(cè)、基因特異位點(diǎn)甲基化的檢測(cè)和新甲基化位點(diǎn)的尋找 1) 基因組整體水平甲基化分析 a) 高效液相色譜柱（HPLC）及相關(guān)方法 b) SssI 甲基轉(zhuǎn)移酶法 c) 免疫化學(xué)法 d) 氯乙醛法 2) 特異性位點(diǎn)的DNA甲基化的檢測(cè) a) 甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶(MS-RE)-PCR/Southern法 b) 直接測(cè)序法 c) 甲基化特異性的PCR d) 甲基化敏感性單核苷酸引物延伸(Ms-SnuPE) e) 結(jié)合重亞硫酸鹽的限制性內(nèi)切酶法（combined bisulfite restriction analysis，COBRA） f) 甲基化敏感

如何分析promoter的甲基化

如何分析promoter的甲基化 DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一，真核生物中甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。脊椎動(dòng)物DNA甲基化狀態(tài)與生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控及生理狀態(tài)密切相關(guān)，比如在腫瘤發(fā)生時(shí)，抑癌基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG島中的CpG則