如何測定蛋白質(zhì)分子量？

測定蛋白質(zhì)分子量的常用方法：

粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、SDS-凝膠電泳、滲透壓法、質(zhì)譜法包括電噴霧離子化質(zhì)譜技術(shù)和基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜技術(shù)、光散射法（多角度激光散射）、沉降法（超速離心法）。

1、粘度法

一定溫度條件下，高聚物稀溶液的粘度與其分子量之間呈正相關(guān)性，隨著分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通過測定高聚物稀溶液粘度隨濃度的變化，即可計算出其平均分子量(粘均分子量)。

如果高聚物分子的分子量愈大，則它與溶劑間的接觸表面也愈大，摩擦就大，表現(xiàn)出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之間的經(jīng)驗關(guān)系式為：

聚合物、溶劑性質(zhì)有關(guān)，也和分子量大小有關(guān)。K值受溫度的影響較明顯，而?值主要取決于高分子線團在某溫度下，某溶劑中舒展的程度，其數(shù)值解在0.5～1 之間。K與?的數(shù)值可通過其他絕對方法確定，例如滲透壓法、光散射法等，從粘度法只能測定[η]。 在無限稀釋條件下：

優(yōu)缺點：該方法操作簡單、設(shè)備價格較低，通常不需要標(biāo)準樣品，但無法測定聚合物的分子量分布。

2、凝膠過濾層析法

對同一類型的化合物，洗脫特性與組分的分子量有關(guān)，流過凝膠柱時，按分子量大小順序流出，分子量大的走在前面。Ve與分子量的關(guān)系可用下式表示： V e=K1—K2logMr

K1與K2為常數(shù)，Mr為分子量，Ve也可用Ve—Vo（分離體積），Ve/Vo（相對保留體積），Ve/Vt（簡化的洗脫體積，它受柱的填充情況的影響較?。┗騅av代替，與分子量的關(guān)系同上式，只是常數(shù)不同。凝膠層析主要決定于溶質(zhì)分子的大小，每一類型的化合物如球蛋白類，右旋糖酐類等都有它自己的特殊的選擇曲線，可用以測定未知物的分子量，測定時以使用曲線的直線部分為宜。

優(yōu)缺點：凝膠層析技術(shù)操作方便，設(shè)備簡單，樣品用量少，周期短，重復(fù)性能好，條件溫和，一般不引起生物活性物質(zhì)的變化，而且有時不需要純物質(zhì)，用一粗制品即可，目前已得到相當(dāng)廣泛的應(yīng)用。凝膠層析法測定分子量也有一定的局限性，在pH6—8的范圍內(nèi)，線性關(guān)系比較好，但在極端pH時，一般蛋白質(zhì)有可能因變性而偏離。糖蛋白在含糖量超過5%時，測得分子量比真實的要大，鐵蛋白則與此相反，測得的分子量比真實的要小。

3、凝膠滲透色譜法

分子量的多分散性是高聚物的基本特征之一。聚合物的性能與其分子量和分子量分布密切相關(guān)。

SEC法是按分子尺寸大小分離的，即淋出體積與分子線團體積有關(guān)，利用Flory的粘度公式：

K1、K2、α1、α2可以從手冊查到，從而由第一種聚合物的M-Ve校正曲線，換算成第二種聚合物的M-Ve曲線，即從聚苯乙稀標(biāo)樣作出的M-Ve校正曲線，可以換算成各種聚合物的校正曲線。

優(yōu)缺點：凝膠滲透色譜法分離速度快、分析時間短、重現(xiàn)性好，進樣量少、自動化程度高。但設(shè)備投入較大，價格較高。

4、SDS-凝膠電泳法

SDS是十二烷基硫酸鈉的簡稱，它是一種陰離子表面活性劑，加入到電泳系統(tǒng)中能使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵打開，并結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上（在一定條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)與SDS的結(jié)合比為1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)），使各種蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物都帶上相同密度的負電荷，其數(shù)量遠遠超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，從而使其電泳遷移率只取決于分子大小這一因素，根據(jù)標(biāo)準蛋白質(zhì)分子量的對數(shù)和遷移率所作的標(biāo)準曲線，可求得未知物的分子量。

優(yōu)缺點：實驗成本較低，儀器設(shè)備也相對很簡單，一套電泳裝置即可。但是精確程度相對較低，好的電泳圖譜需要一定的技術(shù)。

5、滲透壓法

在一種理想溶液中，滲透壓與溶質(zhì)濃度成正比。但是實際上蛋白質(zhì)溶液與理想溶液有較大的偏差。在溶質(zhì)濃度不大時，它們的關(guān)系可用下式表示：

當(dāng)c 趨向于0時，RTKc 趨向于0，但π/c 不趨向于0，而是趨向于一定值。測定幾個不同濃度下的滲透壓，以π/c對c作圖，并外推至c為0時的π/c，再代入上式求得Mr。

優(yōu)缺點：操作簡單、快捷，實驗成本低，但準確度較差，受外界溫度影響較大，且要準確配置蛋白質(zhì)溶液。

6、超速離心沉降法

利用超速離心沉降法測蛋白質(zhì)的分子量是在較低離心轉(zhuǎn)速下進行的（8000～20000r/min），離心開始時，分子顆粒發(fā)生沉降，一段時間以后，沉降的結(jié)果造成了濃度梯度，因而產(chǎn)生了蛋白質(zhì)分子反向擴散運動，當(dāng)反向擴散與離心沉降達到平衡時，濃度梯度就固定不變了。

7、光散射法

主要基于染料陰離子在蛋白質(zhì)等電點前與肽鏈上帶正電荷的基團上的結(jié)合作用.。此時生色團聚集于蛋白質(zhì)分子上引起共振散射光增強，它與核酸不同的是生色團必須是帶負電荷的陰離子。

光散射計算的基本公式：

8、電噴霧離子化質(zhì)譜技術(shù)

電噴霧離子化質(zhì)譜技術(shù)（ESI-MS）是在毛細管的出口處施加一高電壓，所產(chǎn)生的高電場使從毛細管流出的液體霧化成細小的帶電液滴，隨著溶劑蒸發(fā)，液滴表面的電荷強度逐漸增大，最后液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子，致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進入氣相的質(zhì)譜技術(shù)。ESI-MS 測定蛋白質(zhì)大分子是根據(jù)一簇多電荷的質(zhì)譜峰群，通過解卷積的方式計算得到蛋白質(zhì)的分子量，由于ESI-MS可以產(chǎn)生多電荷峰，因此使得測試的分子質(zhì)量范圍大大擴大。

優(yōu)缺點：（1）對樣品的消耗少，不會造成樣品的大量浪費；（2）對樣品分子質(zhì)量測試靈敏度、分辨力和準確度都相當(dāng)高；（3）能夠方便地與多種分離技術(shù)聯(lián)用，如毛細管電泳、高效液相色譜等，是解決非揮發(fā)性、熱不穩(wěn)定性、極性強的復(fù)雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法。

9、基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜技術(shù)

基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-MS）是將待測物懸浮或溶解在一個基體中，基體與待測物形成混晶，當(dāng)基體吸收激光的能量后，均勻傳遞給待測物，使待測物瞬間氣化并離子化?；w的作用在于保護待測物不會因過強的激光能量導(dǎo)致化合物被破壞。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電離過程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質(zhì)荷比（M/Z）與離子的飛行時間成正比，檢測離子。

優(yōu)缺點：（1）同ESI-MS 一樣對樣品的消耗很少；（2）隨著質(zhì)量分析器的不斷改進、新的基質(zhì)的不斷發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用以及延遲萃取技術(shù)的使用，使得MALDI-MS 的最高分辨率不斷提高，甚至超過ESI-MS；（3）MALDI-MS 單電荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于對復(fù)雜混合物的分析，且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發(fā)成分，降低了對樣品預(yù)處理的要求；（4）MALDI-TOF 質(zhì)譜對生物大分子分子量的測定范圍是所有測試技術(shù)中最廣的。

如果測定某種蛋白質(zhì)的分子量，采用何種層析法最好？其原理是什么？

需要測定蛋白質(zhì)的分子量，可以直接用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳就可以了，層析法不能測定蛋白子的分子量，但是可以根據(jù)分子量的大小來分離開蛋白。

常用技術(shù)

1、沉淀，

2、電泳：蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據(jù)支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。

4、層析：利用蛋白質(zhì)在固定相與流動相之間不同的分配比例，達到分離目的的技術(shù)。

擴展資料

產(chǎn)品特點

1、處理過程為單純物理過程，無任何相變。設(shè)備操作溫度低，避免了傳統(tǒng)工藝的種種弊端;

2、系統(tǒng)采用先進的膜分離技術(shù)，工藝簡單，運行穩(wěn)定可靠，處理效率高;

3、可以對生產(chǎn)廢水中的有用物質(zhì)進行提純回用，實現(xiàn)經(jīng)濟、環(huán)保雙贏;

4、設(shè)備投資少，運行費用低。

參考資料來源：百度百科——蛋白質(zhì)分離純化

測定蛋白質(zhì)分子量的常用方法

知道蛋白質(zhì)分子量、氨基酸組成計算器 http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/ 一般的方法： SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的分子量 [原理] 十二烷基硫酸鈉（Sodium dodecyl sulfate, 簡稱SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的分子量，是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在實驗基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項新技術(shù)。用這種方法測定蛋白質(zhì)的分子量具有快速靈便，設(shè)備簡單等優(yōu)點。 蛋白質(zhì)的電泳遷移率在一般的電泳方法中，主要取決于它在某PH下所帶的凈電荷量、分子大?。捶肿恿浚┖托螤畹牟町愋?，而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

如何用HPLC進行蛋白質(zhì)純度檢測及含量測定？或測相對分子量？

首先，蛋白質(zhì)的測定一般用凝膠滲透色譜 分子量測定：用hplc測定幾個分子量已知的蛋白質(zhì)，繪制分子量與調(diào)整保留時間相對應(yīng)的標(biāo)準曲線，然后再在相同條件下測未知蛋白的保留時間，用標(biāo)準曲線對照即可的未知蛋白的分子量； 含量測定：用蛋白質(zhì)標(biāo)樣配制一系列不同濃度的蛋白質(zhì)溶液，繪制蛋白質(zhì)濃度與峰高/峰面積相關(guān)的標(biāo)準曲線，再在相同條件下測位置樣品的峰高/峰面積，即可得未知樣品的濃度； 純度測定：保證待測樣品中所有組份均出峰的情況下，用目標(biāo)蛋白的峰面積/峰高除以所有峰峰面積/峰高的總和即可的目標(biāo)蛋白的純度。

如何用page測蛋白質(zhì)的分子量

SDS-PAGE電泳法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量 實驗?zāi)康?了解SDS-PAGE垂直板型電泳法的基本原理及操作技術(shù) 學(xué)習(xí)SDS-PAGE法測定蛋白質(zhì)相對分子量的技術(shù) 實驗原理 SDS-PAGE即十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)： 1. 在混合樣品中各蛋白質(zhì)組分的遷移率主要取決于分子大小和形狀以及所帶電荷量。 2. 在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中，加入適量SDS (陰離子表面活性劑)，使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵打開，并結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上(一定條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)與之結(jié)合比為1.4g SDS/