苯酚硫酸法測多糖含量

多糖樣品含量一般為1.0ml。

苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。

1、制作標準曲線：準確稱取標準葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1。8ml，各以蒸餾水補至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml。

搖勻靜置30分鐘以后于490nm測吸光度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數(shù)，縱坐標為光密度值，得標準曲線。

2、取多糖樣品1.0ml，加1.0ml蒸餾水，然后加入6%苯酚1.0ml，迅速加入濃硫酸5.0ml，在渦旋儀上震蕩，充分混勻，靜置30分鐘，于490nm測定吸光度，并將測得的吸光度帶入標準曲線中，可獲得多糖濃度。

注意：

（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅制作一條標準曲線，顏色持久。

（2）制作標準線宜用相應(yīng)的標準多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9校正μg數(shù)。

（3）對雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標準曲線的校正系數(shù)加以校正計算。

（4）測定時根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1—0.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

苯酚硫酸法測多糖含量

苯酚硫酸法測多糖含量步驟如下：

1、目的要求：測量蒽酮硫酸法不能測量的血清型的過程樣品中的多糖含量。

2、方法原理：糖在濃硫酸作用下，水解生成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚縮合成橙黃色化合物，且顏色穩(wěn)定，在波長490nm處和一定的濃度范圍內(nèi)，其吸光度與多糖含量呈線性關(guān)系正比，從而可以利用分光度計測定其吸光度，并利用標準曲線定量測定樣品的多糖含量。

3、主要實驗儀器及材料：濃硫酸，苯酚，蒸餾裝置，分光光度計，電子天平，坐標紙或電腦等。

注意：

（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅制作一條標準曲線，顏色持久。

（2）制作標準線宜用相應(yīng)的標準多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9校正μg數(shù)。

（3）對雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標準曲線的校正系數(shù)加以校正計算。

（4）測定時根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

苯酚硫酸法測多糖，苯酚硫酸怎么配制？

他們不是一起加入的吧？怎么能先配制呢？ 苯酚硫酸法測多糖。 是將多糖在濃硫酸水合產(chǎn)生的高溫下迅速水解，產(chǎn)生單糖。 單糖中再加入苯酚反應(yīng)（在強酸條件下）生成橙色衍生物。 在波長490nm左右處和一定濃度范圍內(nèi)，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關(guān)系，從而可用比色法測定其含量。 若要一起加入，先配成溶液的話。要先將苯酚溶于（溫）水，然后將濃硫酸綬綬倒入。切不可將溶液注入水中。

苯酚硫酸法測定多糖需要注意哪些問題

苯酚硫酸法測定多糖需要注意哪些問題 原理 多糖在硫酸的作用下先水解成單糖,并迅速脫水生成糖醛衍生物,然后與苯酚生成橙黃色化合物.再以比色法測定. 試劑 1． 濃硫酸：分析純,95.5% 2． 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解,可置冰箱中避光長期儲存. 3． 6%苯酚：臨用前以80%苯酚配制.（每次測定均需現(xiàn)配） 4． 標準葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖. 5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存. 6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中長期儲存.

硫酸苯酚法測多糖有什么要特別注意嗎

1、制作標準線宜用相應(yīng)的標準多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9校正μg數(shù)。

2、對雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標準曲線的校正系數(shù)加以校正計算。

3、測定時根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

擴展資料：

苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100ug范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。

參考資料來源：百度百科-苯酚法測可溶性糖

參考資料來源：百度百科-苯酚-硫酸法