內(nèi)生真菌分子鑒定，its1 its4引物序列

可以用ITS1跟4，這個(gè)引物是通用引物，你在生工或者其他公司合成時(shí)對方應(yīng)該是有現(xiàn)貨的，不提供序列也可以的。如果實(shí)在需要，在網(wǎng)上隨便查查吧，挺容易找到的。條件設(shè)置就按照常規(guī)的就行，這對引物還是很皮實(shí)的，一般都能擴(kuò)出來，開始可以試一下95 3min，95 30s，55 40s，72 1min，72 10min，再根據(jù)具體情況稍微微調(diào)一下就行。你做內(nèi)生菌建議你用ITS1f-ITS4f引物對，就是真菌特異ITS1-4引物對，可能效果更好一些，能一定程度上排除宿主本身DNA的干擾。

酵母DNA 用 ITS1和ITS4 引物， PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有多大。擴(kuò)增基因序列怎么找？

1.不同真菌的ITS片段大小是不一樣的，大小在500-750bp之間，個(gè)別在1000左右 2.土壤樣品的DNA提取物用ITS1和ITS4這對引物擴(kuò)增在500-750bp大都有2個(gè)目標(biāo)條帶是正常的，因?yàn)橥寥乐械恼婢N類很多，所以條帶會多，而且普通電泳無法區(qū)分，所以用切膠回收做克隆測序的話，也會得到很多真菌，而不是單一的，我覺得做克隆測序是可以的

ITS鑒定的真核生物核糖體RNA（rRNA）結(jié)構(gòu)

組成真核生物核糖體RNA( rRNA) 有5 、5 .8 、17 ～18( 以下統(tǒng)稱為18 S) 和25 ～28 S( 以下統(tǒng)稱為28 S) 。對于大多數(shù)真核生物來說, 核糖體rRNA 基因群的一個(gè)重復(fù)單位( rDNA) 包括以下區(qū)段( 按5′→3′方向) : ①非轉(zhuǎn)錄區(qū)( Non Transcribed Sequence), 簡稱NTS ; ②外轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)( External Transcribed Spacer), 簡稱ETS ; ③18 S rRNA 基因, 簡稱18 SrDNA ; ④內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)1( Internal Transcribed Spacer 1) , 簡稱ITS1 ; ⑤5 .8 S rRNA基因, 簡稱5 .8 SrDNA; ⑥內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2 , 簡稱ITS2 ; ⑦28 SrRNA 基因, 簡稱28 S rDNA。ITS1 和ITS2 常被合稱為ITS, 并且5 .8 S RNA 基因也被包括在ITS 之內(nèi)。核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)包含2 個(gè)不同的非編碼區(qū)域, 即ITS1 和ITS4 。ITS 序列在物種屬內(nèi)、近緣屬間乃至科內(nèi)系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系研究中有一定的價(jià)值。真菌核糖體基因由小的亞單元( 18 S) 、ITS1 區(qū)、5 .8 S 區(qū)、ITS2 區(qū)和大的亞單元( 28 S) 構(gòu)成, 頭尾串聯(lián)形成重復(fù)序列, 一個(gè)基因組內(nèi)有60 ～200個(gè)拷貝。

什么是ITS1和ITS4

這對引物主要是擴(kuò)增its區(qū)的，18s的的最后一部分及28s開頭的一部分也會擴(kuò)增，但只有幾十個(gè)bp 5.8s倒是完全包括在內(nèi)

真菌能做菌落pcr嗎

真菌能做菌落pcr 這個(gè)是因?yàn)榇竽c桿菌是桿菌屬于原核生物（細(xì)胞壁是由肽聚糖組成的細(xì)胞壁，且沒有細(xì)胞核），很容易破裂而且在做PCR的時(shí)加的緩沖液下破裂后遺傳物質(zhì)就出來了就可以做模板了（但是濃度不高 所以在做菌落PCR時(shí)加的模板就比較多），而酵母菌是真核生物（有含甲殼素為主要成分的細(xì)胞壁，且有細(xì)胞核），酵母比較難破，就算破了 遺傳物質(zhì)還在細(xì)胞核中，，所以真菌是不可以菌落PCR的。。純手打！