哪位可以提供成功轉(zhuǎn)染raw264.7小鼠巨噬單核細胞步驟及注意事項？
- 教育綜合
- 2024-07-03 07:57:11
哪位可以分享轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞經(jīng)驗？
為了轉(zhuǎn)染raw 264.7小鼠巨噬單核細胞我們實驗室嘗試了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它轉(zhuǎn)染試劑，對于我們8000bp的質(zhì)粒DNA基本轉(zhuǎn)染后都沒有熒光信號；師兄在中山大學(xué)的同學(xué)給我們推薦了他們實驗室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600050轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享。
按照中山大學(xué)師兄給出的方法并結(jié)合我實驗室情況我把自己在6孔板轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的相關(guān)經(jīng)驗整理如下，希望對你轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞有一定的幫助，下面是我首次用轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片，后期進一步優(yōu)化后的新圖片我也會隨后呈上：
一、質(zhì)粒DNA準備
1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent AD600050轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復(fù)合物加入完全培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率
三、注意事項：
1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等轉(zhuǎn)染試劑；
2細胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;
