用pcr技術(shù)將外源dna擴(kuò)增5次，需要每種引物的數(shù)量是多少個(gè)，為什么？

1.兩種引物 2.需要每種7個(gè) 你按照這個(gè)規(guī)律看呢，我做的時(shí)候反正是這樣子，僅供參考哈！

1個(gè)DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)4次,理論上至少需要幾個(gè)引物?

如果是雙鏈,第一次循環(huán)要1對引物,第二次要2對,第三次4對,第四次要8對.總共15對.上下游引物各15條. 如果是單鏈,第一次循環(huán)要1條引物,第二次要1對,第三次2對,第四次要4對.總共7對半.上下游分別8和7條. 不過這都是理論,實(shí)際上引物要多得多才能P出來!

PCR復(fù)制n次,至少需要加入多少引物?

10uM濃度的引物，加個(gè)1ul足矣。在PCR反應(yīng)中，經(jīng)過n次循環(huán)，理論上DNA鏈的數(shù)目擴(kuò)增了2的n次方。PCR的一個(gè)循環(huán)，一個(gè)DNA模板被復(fù)制為2個(gè)DNA片段。

PCR循環(huán)次數(shù)通常就是30左右。循環(huán)數(shù)太多了，雖然在一定程度上能夠提高產(chǎn)物量，但是由于反應(yīng)時(shí)間過長。

有一些非特異產(chǎn)物的擴(kuò)增也會(huì)相應(yīng)增加；而且隨著酶的擴(kuò)增能力下降,合成目標(biāo)片段的能力也會(huì)隨之下降,也可能引起其他的非特異性擴(kuò)增。

擴(kuò)展資料：

PCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即：引物(PCR引物為DNA片段，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。

引物有多種設(shè)計(jì)方法，由PCR在實(shí)驗(yàn)中的目的決定，但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯(cuò)配。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯(cuò)功能。所以實(shí)際使用時(shí)根據(jù)需要必須做不同的選擇。

模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個(gè)原則，第一純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。

參考資料來源：百度百科-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

利用PCR技術(shù)復(fù)制那么多DNA一共需要多少引物?每復(fù)制一次都需要一段引物嗎?

你理解的不錯(cuò)，每次復(fù)制都需要消耗一對引物。不過原理還是要好好學(xué)哦。 首先引物是論“對”就是兩條(rapd等特殊pcr用單條，lamp用6條……算了，那個(gè)不是pcr)，這n對引物是完全一樣的。不要說“段”，說段會(huì)被誤會(huì)成不一樣的序列的~因此你這個(gè)題目也可以答成“一個(gè)完整的pcr中，n次復(fù)制擴(kuò)增都是同一段引物引導(dǎo)的”。 引物雖然分子的數(shù)量很大，但是，那是分子啊~~~反應(yīng)前加試劑只加幾微升就好了。放心~

pcr技術(shù)中需要添加的引物有幾種

PCR技術(shù)的主要步驟如下：

1、dna變性：（90℃-96℃）：在熱作用下，雙鏈dna模板的氫鍵斷裂，行程單鏈dna。
2、退火：（60℃-65℃）：體系溫度降低，引物與dna模板結(jié)合形成局部雙鏈。

3、延伸：（70℃-75℃：以dntp為原料，在taq酶的作用下（72℃左右），以dntp為底物，從引物的3′端開始，從5′→3′端延伸，用模板法合成互補(bǔ)dna鏈。

每一個(gè)周期都被變性、退火和延長，使dna含量加倍?，F(xiàn)在有些pcr即使taq酶活性不是最好的，也能在很短的時(shí)間內(nèi)復(fù)制，因?yàn)閿U(kuò)增區(qū)域很短。

因此，可改為兩步法，即在60℃-65℃同時(shí)進(jìn)行退火和延伸，以減少一次升溫和降溫過程，提高反應(yīng)速度。

底漆設(shè)計(jì)基本原則

1、引物長度：15-30bp，一般約20bp。

2、引物堿基：g+c含量為40-60%，g+c太少擴(kuò)增效果不好，g+c太多易出現(xiàn)非特異性條帶。ATGC應(yīng)隨機(jī)分配，以避免超過5個(gè)嘌呤或嘧啶核苷酸。

3、引物中不應(yīng)有互補(bǔ)序列。

4、兩個(gè)引物之間不應(yīng)有互補(bǔ)序列，特別是要避免3′端的互補(bǔ)重疊。

5、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的同源性不應(yīng)超過70%。引物3′端的8個(gè)堿基不能在待擴(kuò)增區(qū)域外有完整的互補(bǔ)序列，否則容易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。

6、底漆3'端的底座，特別是最后兩個(gè)底座，應(yīng)嚴(yán)格匹配。最好的選擇是G和C。

7、底漆的5'端可以改性。例如，添加限制性酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物素標(biāo)記，熒光物質(zhì)，地高辛，添加其他短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。

擴(kuò)展資料：

pcr技術(shù)的基本原理類似于dna的自然復(fù)制過程，其特異性依賴于靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。

pcr是一種體外dna擴(kuò)增技術(shù)，它依賴于dna聚合酶在模板dna、引物和四種脫氧核苷酸存在下的酶促反應(yīng)。待擴(kuò)增的DNA片段及其兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈引物通過“高溫變性-低溫退火-引物延伸”三步反復(fù)循環(huán)，使DNA片段的數(shù)量成倍增加，因此在短時(shí)間內(nèi)，我們需要大量的特異性基因片段。

在環(huán)境檢測中，靶核酸序列經(jīng)常存在于細(xì)胞提取物等復(fù)雜混合物中，且含量非常低。對于檢測這種復(fù)雜群體中的特定微生物或基因，雜交是不敏感的。

pcr技術(shù)可以將目標(biāo)序列擴(kuò)增幾個(gè)數(shù)量級(jí)，然后用探針雜交檢測擴(kuò)增序列，用于微生物種群結(jié)構(gòu)的定性或定量分析。pcr技術(shù)常與rt-pcr、競爭pcr、巢式pcr、rapd、ardra等技術(shù)結(jié)合使用。

第一代pcr是一種常用的定性pcr技術(shù)。采用普通pcr擴(kuò)增靶基因，瓊脂糖凝膠電泳分析產(chǎn)物。第二代pcr為實(shí)時(shí)pcr（qpcr）。它可以通過在反應(yīng)體系中加入熒光試劑來實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的積累，并用熒光曲線的cq值來量化初始目標(biāo)基因的濃度。

第三代pcr技術(shù)，數(shù)字pcr（dpcr，digpcr）是一種新的核酸檢測和定量方法。它可以通過直接計(jì)數(shù)目標(biāo)分子而不依賴于任何校準(zhǔn)品或外標(biāo)物來確定被檢測到的目標(biāo)分子的絕對數(shù)量，低至單拷貝。

PCR芯片技術(shù)是PCR儀器小型化的發(fā)展趨勢之一，PCR芯片就是在這一趨勢下誕生的。PCR芯片是一種微型PCR儀器，用于在微載體上進(jìn)行PCR反應(yīng)。芯片pcr不僅節(jié)省了大量試劑，降低了實(shí)驗(yàn)成本，而且有助于改進(jìn)。

參考資料：

百度百科-PCR技術(shù)