微生物遺傳育種中常見突變株篩選方法,如何應(yīng)用
- 教育綜合
- 2023-04-03 07:56:57
比較微生物,動植物基因突變的篩選與鑒定方法主要區(qū)別是什么
1.功能互補法:使突變株表達(dá),與空白相對比 2.核酸雜交法:使用突變株基因單鏈與原基因雜交,能完全配就未能成功 3.定位克隆 4.差別雜交分離目地基因怎樣篩選營養(yǎng)缺陷型菌株
在篩選營養(yǎng)缺陷型突變株的工作中,常用三種培養(yǎng)基:
一是基本培養(yǎng)基,它是僅能滿足微生物野生型菌株生長要求的培養(yǎng)基。第二種是完全培養(yǎng)基,它是能滿足某微生物所有營養(yǎng)缺陷型菌株營養(yǎng)要求的天然或半合成培養(yǎng)基。第三種是補充培養(yǎng)基,凡是只能滿足某種營養(yǎng)缺陷型生長需要的合成培養(yǎng)基,就稱為補充培養(yǎng)基。
1、用于誘發(fā)營養(yǎng)缺陷型的誘變劑有亞硝基胍,紫外線,亞硝酸等,其中亞硝基胍的誘發(fā)突變率極高,一般可達(dá)10%以上,另外,隨著誘變劑量的提高突變頻率也增加。
2、在誘變之后存活的菌體中,存活的營養(yǎng)缺陷型菌株的數(shù)量很少,而野生型細(xì)胞卻大量存在,所以常采用抗生素法和菌絲過濾法來篩選營養(yǎng)缺陷型菌株。
3、經(jīng)過第二步,野生型的細(xì)胞和營養(yǎng)缺陷型細(xì)胞數(shù)量比例發(fā)生很大變化,但是終究還是混合體,要設(shè)法把缺陷型菌株從群體分離檢出,可用點植對照法,影印法,夾層法,限量補充培養(yǎng)法來分離。
4、缺陷型菌株的鑒定,實際是測定營養(yǎng)缺陷型菌株所需的生長因子種類。鑒定的方法可分為兩大類:一種方法是在一個平皿中加入一種營養(yǎng)物質(zhì)以測定多株缺陷型菌株(10-50)對該生長因子的需求情況。
第二種方法是在同一個平皿上測定一種缺陷型菌株對許多生長因子的需求情況,成為生長譜法。
擴展資料:
營養(yǎng)缺陷型菌株廣泛應(yīng)用于核苷酸及氨基酸等產(chǎn)品的生產(chǎn)。
1、阻斷代謝途徑,積累中間代謝產(chǎn)物。
2、阻斷分支代謝,改變代謝方向,積累另一終端代謝產(chǎn)物。
3、解除反饋抑制,積累代謝產(chǎn)物。
4、利用滲漏缺陷型進(jìn)行代謝調(diào)控育種。
參考資料來源:百度百科-營養(yǎng)缺陷型菌株