農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中,侵入傷口的農(nóng)桿菌為什么不會(huì)擴(kuò)增,轉(zhuǎn)移到周圍細(xì)胞中?

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法實(shí)際上農(nóng)桿菌會(huì)進(jìn)行增殖的。因此對(duì)于葉盤(pán)或愈傷轉(zhuǎn)化法來(lái)說(shuō),具有一個(gè)脫菌過(guò)程,即在共培養(yǎng)之后的選擇培養(yǎng)基中附加250~500mg/L 的羧芐青霉素或頭孢霉素,用來(lái)抑制農(nóng)桿菌增殖,從而達(dá)到在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中消除轉(zhuǎn)化植物組織中農(nóng)桿菌的作用。對(duì)于花序浸液法轉(zhuǎn)化來(lái)說(shuō),由于種子會(huì)經(jīng)歷干燥過(guò)程,這本身就是一個(gè)脫菌過(guò)程了,

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法為什么通過(guò)大腸桿菌擴(kuò)增基因？

大腸桿菌在生物技術(shù)中的應(yīng)用：大腸桿菌作為外源基因表達(dá)的宿主，遺傳背景清楚，技術(shù)操作簡(jiǎn)單，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟(jì)，倍受遺傳工程專家的重視。目前大腸桿菌是應(yīng)用最廣泛，最成功的表達(dá)體系，常做高效表達(dá)的首選體系。

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理是什么？

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理是構(gòu)建雙元表達(dá)載體系統(tǒng)，由兩種質(zhì)粒組成，一種是位于大腸桿菌中的穿梭質(zhì)粒，另一種是位于農(nóng)桿菌中的輔助性質(zhì)粒。

將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞中后，用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌去侵染植物根部切口，通過(guò)輔助性質(zhì)粒的Vir區(qū)表達(dá)蛋白與重組質(zhì)粒T-DNA區(qū)的反式作用激活T-DNA的轉(zhuǎn)移，從而將目的片段整合到植物細(xì)胞基因組中。隨著愈傷組織的形成，使得新生細(xì)胞均含有該目的片段的基因。

擴(kuò)展資料：

農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)與其他基因轉(zhuǎn)化體系相比，具有許多突出的優(yōu)點(diǎn)：

1、該轉(zhuǎn)化體系是模仿或稱之為利用天然的轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)，成功率高，效果好；

2、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的機(jī)理研究得最清楚，方法最成熟，應(yīng)用也最廣泛；

3、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)轉(zhuǎn)化的外源基因以單拷貝為多數(shù)，遺傳穩(wěn)定性好，并且多數(shù)符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，因此轉(zhuǎn)基因植株能較好地為育種提供了中間選育材料；

4、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)操作比較容易，需要的儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，易于推廣。

參考資料來(lái)源：百度百科-農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

老師 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中農(nóng)桿菌的作用是什么

農(nóng)桿菌細(xì)胞中分別含有Ti質(zhì)粒，其上有一段T-DNA，農(nóng)桿菌通過(guò)侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中，并且可以通過(guò)減數(shù)分裂穩(wěn)定的遺傳給后代。 中學(xué)階段理解到上述層次即可。

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的步驟

1、農(nóng)桿菌培養(yǎng)至適當(dāng)濃度。

2、受體材料消毒處理并切成適當(dāng)大小組織塊。

3、組織塊浸泡于菌液中適當(dāng)?shù)臅r(shí)間。

4、浸泡過(guò)的組織塊放于共培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

5、組織塊轉(zhuǎn)移到篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)，選出陽(yáng)性幼苗。檢測(cè)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌煌？梢杂肞CR擴(kuò)增目的片段；如果有報(bào)告基因GUS、GFP等也可以進(jìn)行染色或熒光觀察。

原理：

選擇一種特制的空質(zhì)粒載體（如PBI121質(zhì)粒載體），其上要求含有T-DNA邊界序列（此處可參見(jiàn)詞條雙元表達(dá)載體系統(tǒng)），在序列之間含有復(fù)制原點(diǎn)、抗性基因、GUS報(bào)告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位點(diǎn)（以上這些構(gòu)成了一個(gè)T-DNA區(qū)）。先通過(guò)雙酶切反應(yīng)酶切空質(zhì)粒載體和目的基因，再通過(guò)酶連反應(yīng)連接空質(zhì)粒載體和目的基因，從而構(gòu)建成完整的重組質(zhì)粒。

以上內(nèi)容參考：百度百科-農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法