同源重組的基因敲除

基因敲除（geneknockout），是指對一個結構已知但功能未知的基因，從分子水平上設計實驗，將該基因去除，或用其它順序相近基因取代，然后從整體觀察實驗動物，推測相應基因的功能。這與早期生理學研究中常用的切除部分-觀察整體-推測功能的三部曲思想相似。
基因敲除除可中止某一基因的表達外，還包括引入新基因及引入定點突變。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應的正?；?，也可以用正?；蚯贸鄳耐蛔兓?。 基因敲除是80年代后半期應用DNA同源重組原理發(fā)展起來的一門新技術。80年代初，胚胎干細胞（ES細胞）分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術基礎。1985年，首次證實的哺乳動物細胞中同源重組的存在奠定了基因敲除的理論基礎。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES細胞基因敲除的小鼠模型。此后的幾年中，基因敲除技術得到了進一步的發(fā)展和完善。
基因敲除的技術路線如下：
（1）構建重組基因載體﹔
（2）用電穿孔、顯微注射等方法把重組DNA轉入受體細胞核內﹔
（3）用選擇培養(yǎng)基篩選已擊中的細胞﹔
（4）將擊中細胞轉入胚胎使其生長成為轉基因動物，對轉基因動物進行形態(tài)觀察及分子生物學檢測。
基因敲除的靶細胞目前最常用的是小鼠ES細胞?；蚯贸募夹g路線雖不復雜，但由于高等真核細胞內外源DNA與靶細胞DNA序列自然發(fā)生同源重組的機率非常低，約為百萬分之一，要把基因敲除成功的細胞篩選出來是一件非常困難的工作。因此，同源重組的篩選和檢測就成了基因敲除技術所要解決的關鍵問題。目前已有多種篩選方法，其中1988年猶它大學的Capecchi教授的研究組發(fā)展的正負雙向選擇系統(tǒng)適用范圍寬且效率較高。

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1.簡述諾貝爾獎的由來，并指出在遺傳學學科科學發(fā)展過程中，哪一位科學家那一年因為什么貢獻而首次獲得諾貝爾生理醫(yī)學獎。 答：a.阿爾費里德·伯恩納德·諾貝爾，1833年10月21日生于瑞典首都斯德哥爾摩。他沒有妻子、兒女，連親兄弟也去世了。諾貝爾發(fā)明了炸藥，取得了成千上萬的科研成果 ，成功地開辦了許多工廠，積聚了巨大的財富。在即將辭世之際，諾貝爾立下了遺囑：“請將我的財產變做基金，每年用這個基金的利息作為獎金，獎勵那些在前一年為人類 做出卓越貢獻的人?！备鶕?jù)他的這個遺囑，從1901年開始，具有國際性的諾貝爾創(chuàng)立了。諾貝爾在遺囑中還寫道：“把獎金分為5份：一、獎給在物理學方面有最重要發(fā)現(xiàn)或 發(fā)明的

基因敲除的意義是什么？

基因敲除的意義在于可以通過基因的缺陷進行試驗，從而得出基因對病理生理的影響。

基因敲除是自80年代末以來發(fā)展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發(fā)展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成功的有基因的插入突變和iRNA，它們同樣可以達到基因敲除的目的。

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哪位知道基因敲除的具體步驟？

基因敲除的步驟是先選好實驗胚胎，然后開始敲除。

基因敲除就是通過同源重組將外源基因定點整合入靶細胞基因組上某一確定的位點，以達到定點修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術。它克服了隨機整合的盲目性和偶然性，是一種理想的修飾、改造生物遺傳物質的方法。

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2007年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎 什么是“基因打靶”或基因敲除

基因打靶――主要是針對腫瘤和先天遺傳性疾病而言，這些疾病的共同點是出現(xiàn)明顯的基因改變（如基因突變、缺失、重疊等），腫瘤即由癌基因的突變或抑癌基因的失活引起。

醫(yī)學科研工作者通過各種手段，如插入自殺基因、RNA干擾、反義寡核苷酸等技術針對這些突變基因的DNA或RNA序列設計出特定的分子片斷。

通過有效的基因轉染方法讓這些分子片斷在腫瘤細胞復制、轉錄、翻譯等過程中發(fā)揮其特定的靶向干預作用，以抑制腫瘤細胞的增殖、分化和侵襲，進而從基因水平達到治療腫瘤的作用。