pcr技術檢驗有微生物的樣品卻沒有檢出,為什么
- 教育綜合
- 2023-11-03 07:57:16
用pcr方法檢測解脲脲原體核酸結果陽性,而微生物常規(guī)培養(yǎng)結果為陰性,可能的原因是什么?
PCR方法無法區(qū)分活菌死菌,只要有都可以檢測到核酸。但微生物培養(yǎng)只能是活菌才可以。所以可能的原因是治療有效,但死菌體還未排出體外。單克隆驗證,菌液PCR有目的條帶的位置,但是質(zhì)粒PCR后,卻沒有批出我的目的條帶這是為什么呀 謝謝
如果PCR系統(tǒng)沒有問題,很可能是質(zhì)粒和染色體發(fā)生了重組。建議提細菌的genome DNA 做一次PCR。如果是陽性,就說明是這樣。 另外,還可以另挑幾個菌落,重新提質(zhì)粒擴增。PCR技術在食品微生物檢測中的應用
PCR 技術檢測微生物的基本原理是在被檢測微生物核酸序列, 在PCR 體系下經(jīng)高溫變性、低溫退火、適溫延伸三步循環(huán)將單個核酸分子序列以2的指數(shù)進行大量復制擴增的過程。即在檢測時, 被檢測微生物雙鏈DNA 序列在94℃變性解鏈成雙鏈, 55℃特異性引物與單鏈DNA 結合, 72℃在引物的引導延伸復制檢測微生物DNA 序列。以上三步進行循環(huán)擴增得到大量的被檢測微生物DNA 序列, 最后一般在凝膠電泳下檢測目的DNA。理論上只要樣品中有一個分子的微生物就可以在短時間內(nèi)用PCR 技術檢測到。食品中污染微生物種類很多, 即使是同一種食品中微生物種類也有很多, 用傳統(tǒng)的方法檢測食品中微生物要分離出所有的微做支原體PCR檢查出有解脲支原體2.38乘10的5次方。但兩天后做微生物培養(yǎng)卻未檢測出有解脲和人型支原體
解脲支原體培養(yǎng)法很簡單,試劑加入培養(yǎng)24小時即可。 PCR比較復雜點,精確性應該更高吧。 正常人也有10%的人解脲支原體陽性,服用阿奇霉素效果較好。
請學生物的同學幫忙介紹一下“PCR”
PCR 一、PCR概述 1、什么是PCR 聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,簡稱PCR)又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。 由美國科學家PE(Perkin Elmer珀金-埃爾默)公司遺傳部的Dr. Mullis發(fā)明,由于PCR技術在理論和應用上的跨時代意義,因此Mullis獲得了1993年化學諾貝爾獎。 2、PCR技術發(fā)展史 PCR原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基展開全文閱讀